1、取50µL新鮮的菌液接種到15-50mL(勿超過50mL)的LB培養(yǎng)基，37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時。室溫下5,000xg離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
2、加入2.5mLBufferA1(確保已加入RNaseA)，用移液器或渦流震蕩確保**沉淀重新懸浮。
3、加入2.5mLBufferB1,輕輕地反轉(zhuǎn)5-10次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。
4、加入600µLBufferN3,立即反轉(zhuǎn)5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
5、將離心管轉(zhuǎn)至高速離心機，在室溫下13,000xg離心10分鐘(若上清中有白色沉淀，可再次離心)。
6、定量吸取離心后的上清液至新的15mL管中(避免吸起沉淀)，加入0.1倍體積的EndoCleanBuffer，混勻后冰浴10分鐘，其間不時搖勻(若EndoCleanBuffer粘稠難吸，可將槍頭剪掉頭后再吸取)。
7、室溫下(冰浴取出后務必使溶液溫度恢復到23oC以上，否則溶液不分層)13,000xg離心10分鐘(也可在2,500xg離心15分鐘)。此時溶液分為兩層，上層水相含有質(zhì)粒，下層紅色有機相含有。
8、將上層水相轉(zhuǎn)移至一個新的15mL管中，加入3mL的BufferN3及3mL的100%ethonal，用手用力甩5次以混勻，該混合溶液需要需馬上進行過柱吸附操作。
9、立即轉(zhuǎn)移6.0mL裂解液至帶收集管的DNA柱中，室溫下>2,500xg離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復此步直至所有的溶液通過DNA柱。
10、可選:向DNA柱中加入3.0mLBufferKB,室溫下>2,500xg離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
11、向離心柱中加入5mL70%乙醇，室溫下>2,500xg離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“11”。
12、將離心柱放回高速離心機中，室溫下>2,500xg開蓋離心10分鐘，以*去除殘留的乙醇。
13、將離心柱轉(zhuǎn)至一個新的15mL離心管中，向DNA柱膜的正中加入0.5mL的EndofreeElutionBuffer，室溫放置1分鐘，>2,500xg離心5分鐘，以洗脫質(zhì)粒DNA。若想提高得率，可用洗脫得到的0.5mL的EndofreeElutionBuffer再洗脫一次，收集到新的離心管中。
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